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熒光顯微鏡的原理和作用介紹

更新時(shí)間:2022-05-25      點(diǎn)擊次數(shù):3199
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒光顯微鏡是以紫外線為光源, 用以照射被檢物體, 使之發(fā)出熒光, 然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。
熒光顯微鏡用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。 細(xì)胞中有些物質(zhì),如葉綠素等,受紫外線照射后可發(fā)熒光;另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,但如果用熒光染料或熒光抗體染色后,經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,熒光顯微鏡就是對(duì)這類(lèi)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量研究的工具之一。
熒光的原理是某些物質(zhì)會(huì)在高強(qiáng)度的短波長(zhǎng)光線照射下,會(huì)發(fā)出波長(zhǎng)稍長(zhǎng)的發(fā)射光(熒光)。
而我們一般都是觀察被激發(fā)熒光基團(tuán)所發(fā)射出來(lái)的波長(zhǎng)稍長(zhǎng)的發(fā)射光(熒光)。
但是激發(fā)的光會(huì)很強(qiáng),所以我們就需要把激發(fā)的光全部濾去,這樣才可以看到熒光基團(tuán)的發(fā)射光(熒光)。
熒光顯微鏡一般都用高強(qiáng)度的汞燈做激發(fā)光源。使用濾色片把不需要的光濾去,只留下激發(fā)熒光集團(tuán)的高強(qiáng)度很純的光線。這個(gè)單色的光線通過(guò)物鏡照射到樣本上之后,樣本會(huì)被激發(fā)出發(fā)射光(熒光),熒光和激發(fā)光都會(huì)沿著物鏡光路返回,這樣的話,就需要用一個(gè)二相色鏡把激發(fā)光濾去,只讓我們需要看到的熒光透過(guò)。
這個(gè)熒光沿著顯微鏡的光路*后到達(dá)目鏡下,然后進(jìn)入我們的眼睛,我們就可以看到熒光基團(tuán)所發(fā)出來(lái)的熒光了。
注:在熒光顯微鏡中,核心的是 1 熒光光源,因?yàn)闊晒庑枰邚?qiáng)度的光才可以被激發(fā)出來(lái),我們一般都用汞燈,另外還有長(zhǎng)壽命金屬鹵素?zé)?,?dāng)然還有激光。2 激發(fā)塊(幾個(gè)濾色塊組成的組件,一般有激發(fā)光濾色片、二相色鏡、發(fā)射光濾色片),因?yàn)槲覀兊臒晒饣鶊F(tuán)都是在特定波長(zhǎng)的光線下才可以激發(fā),并且被激發(fā)的發(fā)射光也具有特定波長(zhǎng)。所以需要選擇合適的激發(fā)塊(主要是選擇激發(fā)光濾色片、二相色鏡、發(fā)射光濾色片這三個(gè)的可以通過(guò)的光線波長(zhǎng)等參數(shù))。
另外物鏡也對(duì)熒光顯微鏡有很大影響。因?yàn)橹挥懈邫n次的物鏡才可以提供完好的色差矯正。 
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